手性固定相的合成及其用于薄层色谱手性拆分(6)
制作过程中用了两种粘合剂，第一种为羧甲基纤文素钠，第二种为二氯甲烷加乙醇，用羧甲基纤文素钠制成的薄层板表面光滑，用二氯甲烷加乙醇制作的薄层板表面有一层均匀的粉，通过对盐酸普萘洛尔的拆分发现，第二种有较好的分离能力。
2.2.3 展开剂的选择
实验中一共尝试了13类26种展开剂，在这些展开剂分离对映体实验中发现乙腈：甲醇：水=15：2：1；乙醇：正己烷：水：三乙胺=5:3:1:0.25这两个展开体系可以分出两个点，但是这两个斑点刮下后做液相，发现对映体并没有得到分离。在这种情况下，尝试用OJ柱尝试在流动相为正己烷：异丙醇=9:1的条件下分离盐酸普萘洛尔原样，发现在这种条件下，原样得到了分离。由于OJ柱的主要成分就是三(4-甲基苯甲酰基)纤文素，所以尝试展开剂正己烷，异丙醇，三乙胺体系，最终发现能够使盐酸普萘洛尔成功分离的展开剂体系是正己烷：异丙醇：三乙胺=5：5：0.04。
2.2.4 显色方法的选择
由于盐酸普萘洛尔存在苯环结构，所以显色方法可以选择碘缸和紫外灯。展开过程结束时，将薄层板从展开剂中取出，用吹风机将表面吹干后在紫外灯下观察（波长选择254nm）。或将薄层板吹干后，放入碘缸5min后取出即可显色。
2.2.5 薄层色谱结果的高效液相色谱验证
在显色条件下用铅笔圈出薄层板上的分离结果，然后将其刮下后加入乙醇溶解，离心后用注射器吸取，依次用0.45μ和0.22μ过滤头过滤后，用手性高效液相色谱法验证斑点的分离情况。
高效液相色谱条件：OJ柱，流动相为正己烷：异丙醇=9:1，检测波长为290nm，流速1.0ml/min。
3 结果与讨论
3.1 三(4-甲基苯甲酰基)纤文素的合成
取1g微晶纤文素，在烘箱中80℃下烘30min，去除其中的水分，用40ml吡啶溶胀30min，加入20ml对甲基苯甲酰氯，0.1g对二甲基氨基吡啶，混合均匀后在密闭条件下超声反应2h， 继续反应隔夜。加入反应液相同体积的乙醚沉淀得到三(4-甲基苯甲酰基)纤文素的白色絮状沉淀，将沉淀用大量乙醇清洗，直至没有氯离子为止。然后将清洗的产物放置在真空干燥器中减压干燥过夜。
3.1.1 溶胀与否对反应的影响
通过红外观察红外光谱图，波段3400附近的羟基峰，以及1700附近的羰基峰大小来判断酯化的结果。
图3.1反应产物的红外光谱图（微晶纤文素溶胀）
反应条件：吡啶加入量（40ml/g MC，溶胀30min），对甲基苯甲酰氯（20ml/g MC），4-二甲基氨基吡啶（0.1g）
图3.2反应产物的红外光谱图（微晶纤文素未溶胀）
反应条件：吡啶加入量（40ml/g MC,未溶胀），对甲基苯甲酰氯（20ml/g MC），4-二甲基氨基吡啶（0.1g）
根据图3.1和图3.2可以看出，微晶纤文素经充分溶胀后，酯化基本完全。
实验过程中做了对比实验，用酯化较完全的和酯化不完全的产物分别铺板后，在同一种展开剂下对盐酸普萘洛尔样品进行分离，发现最后实验现象相差不是很大。虽然现象相差不是很大，但是酯化完全的三(4-甲基苯甲酰基)纤文素在理论上要比酯化不完全的三(4-甲基苯甲酰基)纤文素具有较好的手性识别能力，所以在实验时最好将微晶纤文素溶胀后再进行酯化反应。
微晶纤文素与对甲基苯甲酰氯合成三（4-甲基苯甲酰基）纤文素的反应较慢, 这主要是因为: (1) 苯甲酰氯的反应活性较低; (2) 微晶纤文素发生酯化反应时, 受其空间位阻的影响, 每一个葡萄糖残基中的3 个羟基同时完全酯化存在困难。加入亲核酰化催化剂, 增强微晶纤文素羟基的反应活性可以增加羟基和对甲基苯甲酰氯的反应几率; 而采用超声反应可以降低空间位阻的影响, 使3个羟基的酯化几率相当, 最终使其接近完全酯化。实验使用超声法合成三（4-甲基苯甲酰基）纤文素, 反应条件温和, 操作简便, 酯化率高。
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