分光光度法快速测定果蔬中农药残留的研究(15)
20 0.303 0.131 0.1010 0.0437 56.77
25 0.437 0.193 0.1458 0.0643 55.90
30 0.498 0.218 0.1661 0.0727 56.23
将对应的数据代入以上公式，即可求得空白斜率、农药斜率、抑制率。由表3.6.1可知，随着酶液用量的增加，空白斜率和农药斜率都呈上升趋势，但是抑制率无明显变化。斜率增大可以增加灵敏度，但是相应的试剂费用也会增加。所以，从灵敏度和试剂费用两者的综合考虑来看，最后还是选择中间那组，即原配方的酶液用量，酶用量为20uL。
3.6.2 改变底物用量对抑制率的影响
为了验证是否原配方是最佳的方案，我就尝试着改变试剂包中各种物质的量。原配方是：20uL酶+2.5mL样品+100uL显色剂+20uL底物。接下来就改变底物的用量，分别为10uL、15uL、20uL、25uL、30uL。而样品、显色剂、酶的量不改变，样品是浓度为0.1mg/L的敌敌畏。测得实验数据如下表3.6.2所示。
表3.6.2 底物用量对抑制率的影响
底物用量（uL） △Ao（空白反应3min的变化值） △At（农药反应3min的变化值） 空白斜率（Ko） 农药斜率（Kt） 抑制率Y(%)
10 0.098 0.043 0.0327 0.0143 56.12
15 0.148 0.065 0.0493 0.0217 55.98
20 0.303 0.131 0.1010 0.0437 56.77
25 0.417 0.184 0.1390 0.0613 55.90
30 0.471 0.206 0.1570 0.0687 56.24
空白斜率、农药斜率、抑制率的计算公式，如P27中3.6.1所示，代入对应的数据即可求得。由表3.6.2可知，随着底物用量的增加，空白斜率和农药斜率都呈上升趋势，但是抑制率无明显变化。斜率增大可以增加灵敏度，但是相应的试剂费用也会增加。所以，从灵敏度和试剂费用两者的综合考虑来看，最后还是选择中间那组，即原配方的底物用量，底物用量为20uL。
3.6.3 改变显色剂用量对抑制率的影响
为了验证是否原配方是最佳的方案，我就尝试着改变试剂包中各种物质的量。原配方是：20uL酶+2.5mL样品+100uL显色剂+20uL底物。接下来就改变显色剂的用量，分别为50uL、80uL、100uL、130uL、150uL。而样品、底物、酶的量不改变，样品是浓度为0.1mg/L的敌敌畏。测得实验数据如下表3.6.3所示。
表3.6.3 显色剂用量对抑制率的影响
显色剂用量（uL） △Ao（空白反应3min的变化值） △At（农药反应3min的变化值） 空白斜率（Ko） 农药斜率（Kt） 抑制率Y(%)
50 0.295 0.130 0.0983 0.0433 55.93
80 0.283 0.125 0.0944 0.0417 55.82
100 0.303 0.131 0.1010 0.0437 56.77
130 0.288 0.127 0.0959 0.0423 55.90
150 0.305 0.132 0.1016 0.0440 56.70