分光光度法快速测定果蔬中农药残留的研究(6)
5、其他 免疫分析法(IA) [20][21] 基于抗原抗体特异性识别和结合反应为基础的分析方 灵敏度高、方便快捷、容量大 、成本低、安全可靠，可广泛用于现场样品和大量样品的快速监测 抗原不易得到，对农作物的监测需要严格复杂的纯化过程
生物传感器[22][23]
利用农药对乙酰胆碱酶抑制作用 研制酶传感器，可用于对相应农药残留进行快速定性定量检测 微型化 ，响应速度快，样品量极少，甚至可以插入生物组织或者细胞内实现超微量在线快速跟踪分析 稳定性、重现性及使用寿命还有待研究
生物芯片技术 将抗有机磷固体定于生物芯片上，通过被标记过的抗原与抗体的特异性结合反应达到对有机磷的检测 显色技术发达：酶标技术、荧光素标记技术、发光免疫标记技术。 抗体与芯片进行孵育反应时间长，技术有待提高，尚不完善
活体生物测定法[24] 主要用发光细菌、敏感家蝇、大型水蚤等作为测试对象进行检测 快速、简便、灵敏、价廉、适合于现场 农药浓度与发光强度的线性关系不够准确
固相萃取技术
以选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱分离原理对样品进行分离和纯化 固相萃取不需要大量互不相溶的溶剂；处理过程中不会产生乳化现象 目标化合物的回收率和精密度要略低于液／液萃取
1.5 酶抑制法原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度成正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱或丁酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质。用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化计算出抑制率，即可通过抑制率判断出样品中是否还有有机磷和氨基甲酸酯类农药的存在。
有机磷及氨基甲酸酯杀虫剂的共同毒理机制为抑制乙酰胆碱酯酶(AChE) 的活性。AChE 对神经传递介质乙酰胆碱(ACh) 有如下的催化反应:
HO(CH3)3NCH2CH2OOCCH3+H2O HO(CH3)3 NCH2CH2OH+CH3COOH (2.1)
（乙酰胆碱） （胆碱）
当农药抑制了乙酰胆碱酯酶的活性,造成乙酰胆碱的积累,影响了正常的神经传导,即引起了神经中毒。为了测定AChE 的活性被抑制的程度,我们采用了如下化学反应:
Cl(CH3)3NCH2CH2SOCCH3 Cl(CH3)3 NCH2CH2SH + CH3COOH (2.2)
(氯化硫代乙酰胆碱) (氯化硫代胆碱)
氯化硫代胆碱与5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）(DTNB)作用生成5-琉基-2-硝基苯甲酸(黄色)，用溶液吸光度的变化值(特征波长412nm)测出乙酰胆碱酯酶的抑制率 。
优点：简便、快速灵敏、前处理简单、检测时间 短、所需仪器设备简单、成本低廉等优点，可及时对市场上含残毒的蔬果进行监控，深受广大基层监督部门、生产基地及市场的欢迎。所以，综上考虑，最后选择酶抑制分光光度法做为检测方法。
2 实验内容