分光光度法快速测定果蔬中农药残留的研究(9)
有机磷及氨基甲酸酯杀虫剂的共同毒理机制为抑制乙酰胆碱酯酶(AChE) 的活性。AChE 对神经传递介质乙酰胆碱(ACh) 有如下的催化反应:
HO(CH3)3NCH2CH2OOCCH3+H2O HO(CH3)3 NCH2CH2OH+CH3COOH (2.1)
（乙酰胆碱） （胆碱）
当农药抑制了乙酰胆碱酯酶的活性,造成乙酰胆碱的积累,影响了正常的神经传导,即引起了神经中毒。为了测定AChE 的活性被抑制的程度,我们采用了如下化学反应:
Cl(CH3)3NCH2CH2SOCCH3 Cl(CH3)3 NCH2CH2SH + CH3COOH (2.2)
(氯化硫代乙酰胆碱) (氯化硫代胆碱)
氯化硫代胆碱与5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）(DTNB)作用生成5-琉基-2-硝基苯甲酸(黄色)，用溶液吸光度的变化值(特征波长412nm)测出乙酰胆碱酯酶的抑制率 。
（2）酶抑制率的计算公式
式中：△Ao—— 对照溶液反应3min吸光度的变化值；
△At—— 样品溶液反应3min吸光度的变化值；
Ko —— 对照溶液吸光度值随时间的变化曲线的斜率；
Kt —— 样品溶液吸光度值随时间的变化曲线的斜率；
3 结果与讨论
3.1 最佳波长λ的确定
分光光度法分析的原理是利用物质对不同波长的光呈现选择性吸收现象来进行物质的定性和定量分析。所以，在检测果蔬中农药残留之前首先必须要确定一个最佳的吸收波长，这样才有利于得到最大的吸光度，减小实验误差。下表就是在同一浓度（C≈0.1mg/L）不同波长下的吸光度变化值（反应3min前后），数据如表3.1。
表3.1 不同波长对吸光度（A）的影响
波长λ（nm） A1（0.5min时） A2(3.5min时) △At(3min变化值)
380 1.109 1.228 0.119
385 0.796 0.916 0.120
390 0.590 0.712 0.122
395 0.441 0.565 0.124
400 0.307 0.434 0.127
405 0.247 0.377 0.130
410 0.195 0.326 0.131
415 0.164 0.294 0.130
420 0.145 0.272 0.127
425 0.125 0.249 0.124
430 0.119 0.241 0.122
435 0.106 0.227 0.121
图3.1 吸光度在不同波长下的变化图
从上表3.1中发现当波长λ=410nm的时候，反应3min的吸光度变化值△At=0.131，是最大值。从上图中，也容易看到在410nm附近的吸光度是最大的。又根据查到的相关文献得知，波长λ=412nm时，吸光度是最大的。于是，我又测定了412nm时的吸光度，发现也是0.131，所以，本次实验就在波长λ=412nm下测定。