分光光度法快速测定果蔬中农药残留的研究(7)
2.1 检测方法的选择
有机磷和氨基甲酸酯类农药是我国应用最为广泛的两种农药。也是目前农药残留检测的重点[25]。其检测方法主要是仪器分析法[26,27]，该法灵敏度高、成本高、消耗时间长、且需要有熟练技术的操作人员和分析仪器，不能满足现场快速测试的要求。通过上面的各种方法的比较得出：酶抑制法作为有机磷农药残留的主要速测方法，具有简便、快速及成本低廉等优点，深受广大基层监督部门、生产基地及市场的欢迎[28,29]。随着酶抑制法技术的发展，近年来出现了商品化的乙酰胆碱酯酶试剂包[30]，我这次就对商品化的乙酰胆碱酯酶试剂包进行优化研究，看看是否可以在保证检测灵敏度的条件下，减少试剂用量，以降低成本。
最后选定的方法：
检验方法 原理及应用 优点
酶抑制分光光度法 其原理就是在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度成正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱或丁酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质。用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化计算出抑制率，即可通过抑制率判断出样品中是否还有有机磷和氨基甲酸酯类农药的存在。 简便、快速灵敏、前处理简单、检测时间 短、所需仪器设备简单、成本低廉等优点，可及时对市场上含残毒的蔬果进行监控，深受广大基层监督部门、生产基地及市场的欢迎。
2.2 试剂与材料
试剂：
敌敌畏（又名DDVP，学名O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯 C4H7Cl2O4P 分子量：
220.98 南通江山农药化工股份有限公司）
酶试剂包（环凯有限公司），其中包括：
①缓冲液（10包） 主要成分：无水磷酸氢二钾（国药集团化学试剂有限公司 K2HPO4 分
子量：174.22 化学纯）；磷酸二氢钾（国药集团化学试剂有限公司
KH2PO4 分子量：136.09 分析纯）；
②底物（2瓶） 主要成分：氯化硫代乙酰胆碱（ AtchCl SIGMA公司 C7H16NOSCl 分
子量：197.7）
③显色剂（1瓶） 主要成分：二硫代二硝基苯甲酸，即5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（国
药集团化学试剂有限公 司 C14H8N2O8S2 分子量： 396.35 ）；碳酸氢钠（国
药集团化学试剂有限公司 NaHCO3 分子量：84.01 分析纯）；
④酶（5瓶） 主要成分：乙酰胆碱酯酶（BioChemika公司 英文名： acetylcholine esterase
简称AchE ）
材料： 新鲜蔬果、擦镜纸、滤纸
2.3 实验仪器
722型可见光分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司 生产）；
电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司 生产）；
恒温干燥箱（101-S型数显式不锈钢电热鼓风恒温干燥箱，上海锦凯科学仪器有限公
司，沪粤科学仪器厂 生产）
10uL微量进样器（2个 上海佳安分析仪器厂 生产）
100uL微量进样器（上海佳安分析仪器厂 生产）
烧杯（1000mL、500ml、100ml若干只）、容量瓶、量筒（500mL）、温度计、移液管（10mL、1ml、2.5ml若干只）、漏斗、玻璃棒等玻璃器具（上海申玻仪器公司 生产）、剪刀、冰箱。